pcr檢測材料有nc模嗎,pcr的材料
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檢測基因是否表達成功的方法?
有多種。以下是其中幾種常見的方法:
1. 分子生物學(xué)方法:通過RT-PCR、Northern blot、Western blot等技術(shù)檢測基因的轉(zhuǎn)錄和翻譯產(chǎn)物,從而判斷基因是否表達成功。
2. 生物化學(xué)方法:通過檢測細胞或組織中是否存在基因表達的蛋白質(zhì)或其他產(chǎn)物,來確定基因是否表達成功。
3. 免疫學(xué)方法:通過特異性抗體檢測細胞或組織中是否存在基因表達的蛋白質(zhì),從而判斷基因是否表達成功。
4. 生物學(xué)方法:通過觀察細胞或組織的表型變化,推斷基因是否表達成功,比如觀察細胞分化、形態(tài)學(xué)變化等。
總的來說,應(yīng)根據(jù)具體實驗條件和目的選擇適合的方法來檢測基因是否表達成功。
主要用探針檢測mRNA或用抗體檢測出表達的蛋白質(zhì)(轉(zhuǎn)錄水平上對特異mRNA的檢測和翻譯水平上對特異蛋白質(zhì)的檢測)
詳見下面:
外源基因轉(zhuǎn)錄水平的鑒定
基因表達分為轉(zhuǎn)錄及翻譯兩階段,轉(zhuǎn)錄是以DNA(基因)為模板生成mRNA的過程,翻譯是以mRNA為模板生成蛋白質(zhì)的過程,檢測外源基因的表達就是檢測特異mRNA及特異蛋白質(zhì)的生成。所以基因表達檢測分為兩個水平:即轉(zhuǎn)錄水平上對特異mRNA的檢測和翻譯水平上對特異蛋白質(zhì)的檢測。轉(zhuǎn)錄水平上的檢測主要方法是Northern雜交,它是以DNA或RNA為探針,檢測RNA鏈。和Southern雜交相同,Northern雜交包括斑點雜交和印跡雜交。
也可用RT-PCR(reverse transcribed PCR)方法檢測外源DNA在植物體內(nèi)的轉(zhuǎn)錄表達。其原理是以植物總RNA或mRNA為模板進行反轉(zhuǎn)錄,然后再經(jīng)PCR擴增。如果從細胞總RNA提取物中得到特異的cDNA擴增條帶,則表明外源基因?qū)崿F(xiàn)了轉(zhuǎn)錄。此法簡單、快速,但對外源基因轉(zhuǎn)錄的最后決定,還需與Northern雜交的實驗結(jié)果結(jié)合。
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